凝膠層析技術(shù)的原理和過程
凝膠層析（又叫凝膠過濾或分子篩）
凝膠層析是指混和物隨流動相流經(jīng)固定相的層析柱時，混合物中各組分按其分子大小不同而被分類的技術(shù)。
1. ?原理
凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，凝膠的每個顆粒內(nèi)部都具有很多細微的小孔，如同篩子一樣。
常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。
葡聚糖凝膠介質(zhì)是由多聚葡聚糖與環(huán)氧綠丙烷交連而成。zui常用的葡聚糖凝膠層析介質(zhì)是Sephadex G系列，不同型號的凝膠用G表示，G代表交聯(lián)度，從G10到G100?！癎”后面的 ? ? ? ?數(shù)字表示每10g干膠的吸水量，可根據(jù)待分離混和物分子量大小選用不同“G”值的凝膠。
2. ?分離過程：
樣品隨洗脫液的流動下移
3. ?影響凝膠柱層析的主要因素
（1）層析柱的選擇與裝填
層析柱的大小應(yīng)根據(jù)分離樣品量的多少及對分辨率的要求而定。凝膠柱填裝后用肉眼觀察應(yīng)均勻、無紋路、無汽泡。
（2）流動相――洗脫液的選擇：是含有一定濃度鹽的緩沖液，目的是為了防止凝膠可能有吸附作用。其選擇主要取決于待分離樣品，一般來說只要能溶解洗脫物質(zhì)，并不使其變性的緩沖液都可用于凝膠層析。
（3）加樣量：加樣量的多少應(yīng)根據(jù)具體的實驗而定：一般分級分離時加樣量約為凝膠柱床體積的1％－5％，而分組分離時加樣量約為凝膠柱床體積的10%-25%.
（4）凝膠再生：葡聚糖凝膠再生使用NaOH（0.2M）和NaCl(0.5M)混合液處理。
推薦
-
焦點事件
