蛋白提取純化注意事項
1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫內(nèi)進行。
2、不要太稀，蛋白濃度維持在μg/mL～mg/mL。
3、合適的pH，除非是進行聚焦層析，所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同，防止蛋白質(zhì)的沉淀。
4、使用蛋白酶抑制劑，防止蛋白酶對目標(biāo)蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質(zhì)時，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA對蛋白的污染。
5、避免樣品反復(fù)凍融和劇烈攪動，以防蛋白質(zhì)的變性。
6、緩沖溶液成分盡量模擬細胞內(nèi)環(huán)境。
7、在緩沖溶液中加入0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇），防止蛋白質(zhì)的氧化。
8、加1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑，防止重金屬對目標(biāo)蛋白的破壞。
9、使用滅菌溶液，防止微生物生長。
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