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血清葡萄糖測(cè)定實(shí)驗(yàn)

2020.8.10
實(shí)驗(yàn)方法原理葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖醛酸,并產(chǎn)生過氧化氫:葡萄糖十2H2O+O2=葡萄糖酸十2H2O2。

在色原性氧受體(如聯(lián)大菌香胺,4氨基安替比林偶聯(lián)酚)的存在下,過氧化物酶催化過氧化氫,氧化色素原,生成有色化合物。
實(shí)驗(yàn)步驟

一、實(shí)驗(yàn)試劑:

l、lmol/L磷酸鹽緩沖液(PH7.0):溶解無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g于800ml蒸餾水中,用lmoL/L氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)PH值至70,然后用蒸餾水稀釋至1L.

2、酶試劑:取葡萄糖氧化酶1200W 過氧化物酶1200w,4-氨基安替比林10mg,疊氮鈉10Omg,加上磷酸鹽緩沖液至80ml左右,調(diào)節(jié)pH7.0加磷酸鹽緩沖液到100ml,置冰箱保存,至少可穩(wěn)定三個(gè)月。

3、酚溶液:重蒸餾酚100mg溶于100ml蒸餾水中,貯存棕色瓶中.

4、酶酚混合試劑;酶試劑和酚溶液等量混合,在冰箱內(nèi)可以存放一個(gè)月.

5、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(5.6mmol/L)

二、操作:

取數(shù)支16mmm×100mm試管,按下表進(jìn)行操作。



混勻,置37℃水浴中,保溫15min,用分光光度計(jì),波長(zhǎng)505nm,比色杯光徑1.0cm,以空白管調(diào)零,分別讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管吸光度。

三、計(jì)算:

血清葡萄糖mmol/L=測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度

參考值:空腹血清葡萄糖為3.89-6.11mmol/L


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注意事項(xiàng)

1、新配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液主要是α型,故需放置2h以上(最好過夜),待等適衡后方可應(yīng)用.

2、葡萄糖氧化酶催化反應(yīng)的最適PH范圍(6.5-8.0),但當(dāng)PH低至6.6時(shí),反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度略有下降,選用PH7.0土0.1.

3、由于溫度對(duì)本法影響較大,故試劑從冰箱取出達(dá)到室溫時(shí),再進(jìn)行測(cè)定.

4、測(cè)定樣本以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑的血漿為好。


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