慢病毒行業(yè)新標(biāo)準(zhǔn)——絕對(duì)定量滴度測(cè)定
絕對(duì)定量時(shí)代——引領(lǐng)慢病毒行業(yè)新標(biāo)準(zhǔn)
高大上的慢病毒是怎樣煉成的（一）
慢病毒活性滴度用什么單位？
看TU！看TU！看TU！
TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒顆粒數(shù)。其他的VG/mL，VP/mL都是所有病毒顆粒數(shù)，死的活的都算上，一片虛假繁榮，請(qǐng)自由玩兒去！
慢病毒活性滴度怎么標(biāo)定最準(zhǔn)？
絕對(duì)定量！絕對(duì)定量！絕對(duì)定量！
又絕對(duì)又定量的方法，準(zhǔn)到不要不要的！再說(shuō)了，這“絕對(duì)定量”是醫(yī)療級(jí)病毒產(chǎn)品的公認(rèn)滴度檢測(cè)方法，諾華、Juno，這些CarT大佬們都用！不準(zhǔn)？不準(zhǔn)的話FDA能認(rèn)嗎？
復(fù)雜又昂貴的方法，為了準(zhǔn)，咱們?nèi)汤玻?/p>
1.標(biāo)準(zhǔn)品檢定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，精確定量病毒基因組DNA拷貝數(shù)
2.測(cè)定插入細(xì)胞基因組的5’LTR—3’LTR病毒基因組拷貝數(shù)
3.工具細(xì)胞 293T基因組中的病毒特征單拷貝基因A和宿主特征單拷貝基因B
4.TU=N*C/V=（初始細(xì)胞/感染病毒體積）×（2×A基因拷貝/B基因拷貝），計(jì)算感染效率
5.不要反轉(zhuǎn)錄，不要受RNA降解或反轉(zhuǎn)錄效率影響。
6.如果病毒有熒光或者抗性，再結(jié)合表型聯(lián)合判斷
準(zhǔn)！準(zhǔn)！準(zhǔn)！重復(fù)性杠杠滴！
處女座實(shí)驗(yàn)狗都無(wú)法抵抗的滴度標(biāo)定方法！
慢病毒滴度標(biāo)那么準(zhǔn)，有用嗎？
我！@#￥%&*……
有人問(wèn)我，為啥我的細(xì)胞用慢病毒一感就死？
為啥我的細(xì)胞用慢病毒感染后會(huì)出現(xiàn)小黑點(diǎn)？
很可能是，過(guò)感染啦！過(guò)感染啦！過(guò)感染啦！
有木有先做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定細(xì)胞的MOI？有沒(méi)有根據(jù)病毒滴度準(zhǔn)確計(jì)算病毒用量？
越是高濃度高純度的病毒，越是需要精確計(jì)算滴度，以避免感染不足或者過(guò)量感染，保證最好的細(xì)胞狀態(tài)，以繼續(xù)下游實(shí)驗(yàn)，這樣才能省時(shí)省力省病毒啊啊?。。?！
最后，附贈(zèng)感染預(yù)實(shí)驗(yàn)步驟詳解，請(qǐng)叫我雷鋒！
吉?jiǎng)P基因引領(lǐng)慢病毒行業(yè)新標(biāo)準(zhǔn)——慢病毒活性標(biāo)定從此進(jìn)入新時(shí)代，不絕對(duì)定量的慢病毒，拜拜！
