生化分析儀的單波長和雙波長具體指的是什么?
?? 在生化分析儀的使用說明中我們發(fā)現(xiàn)有這樣兩個(gè)概念,即單波長、雙波長,但對(duì)于很多新手來說,對(duì)此并不了解,下面我們來仔細(xì)說說。
生化分析儀采用一個(gè)波長檢測物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分,或在混合反應(yīng)液中待測組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時(shí),可以選用。
在吸光度檢測中,使用一個(gè)主波長和一個(gè)次波長的稱雙波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí),采用雙波長方式更好。
雙波長的作用:雙波長(di-wavelength)測定優(yōu)點(diǎn)是①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾。從光源,到比色杯、單色器、檢測器的整個(gè)光路系統(tǒng)中,均存在著隨時(shí)間發(fā)生變化的不穩(wěn)定的檢測信號(hào),即噪音,而雙波長檢測是同時(shí)進(jìn)行的,兩種波長檢測產(chǎn)生的噪音基本上相同,因而能消除噪音干擾。當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時(shí),會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收,而干擾測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。采用雙波長方式測定可以部分消除這類干擾,提高檢測的準(zhǔn)確性。
次波長的確定方法:當(dāng)被測物的主波長確定之后,再選擇次波長。如根據(jù)甘油三酯等干擾物吸收光譜特征,選擇次波長,使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值,而被測物在主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。一般來說,次波長應(yīng)大于主波長100nm。以主波長與次波長吸光度差來計(jì)算結(jié)果。
雙波長的具體應(yīng)用:對(duì)于某些反應(yīng)速度快且無法設(shè)置為兩點(diǎn)終點(diǎn)法的分析項(xiàng)目,尤其是單試劑分析中,可以利用雙波長的方式來部分消除樣品本身的光吸收干擾。目前用單試劑法測定的項(xiàng)目應(yīng)用雙波長的為血清總蛋白(雙縮脲法)主波長500nm,次波長576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波長分別為600和700nm;鈣(偶氮砷Ⅲ法)主、次波長分別為660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波長為340、405nm,鎂(二甲苯胺藍(lán)法)主、次波長為505和600nm。