CRISPR分子診斷技術(shù)（四）
19 ???由于其高靈敏度和特異性，CRISPR診斷技術(shù)或CRISPR-Dx可以有很多用途：病毒檢測和病毒亞型區(qū)分，病菌識別和耐藥性基因確認(rèn)，即時檢測（POCT）, 患者基因分型，以及癌癥突變分析和液體活檢。這篇論文也初步展示了CRISPR-Dx在這些方面的應(yīng)用前景。
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20???比如，利用SHERLOCK，張鋒團(tuán)隊從患者的血清（S）或尿液（U）里檢測到濃度低至每微升含單一拷貝的塞卡病毒（ZIKV）。美中不足的是，在用SHERLOCK檢測之前，需要從患者的體液樣品中提純病毒RNA，這影響了該方法的便捷性。
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?? SHERLOCK也可被用在癌癥液體活檢中，從（模擬）患者的游離DNA (cfDNA) 樣品中檢驗出只占0.1%的基因突變（BRAF
V600E）。也就是說，SHERLOCK的特異性可達(dá)到單堿基分辨度。要想達(dá)到如此高的特異性，crRNA的設(shè)計很關(guān)鍵。
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22? ? 2017年5月，在張鋒團(tuán)隊的Science論文發(fā)表不到一個月后，Doudna團(tuán)隊又在Molecular Cell上發(fā)表了一篇論文。文中發(fā)現(xiàn)所有的Cas13a可以被分為兩個亞族。和不同亞族Cas13a配套的crRNA具有不同的輔助序列，激活后Cas13a-crRNA對同一報告RNA的非特異剪切活性也有差別。作為兩個亞族的代表，LbaCas13a更易剪切5個A串成的報告RNA，而LbuCas13a偏愛剪切5個U串成的報告RNA。兩個Cas13a亞族的區(qū)別，使它們可以被用來構(gòu)建多重高通量診斷分析，即在一次測試中可以同時檢驗多個靶分子。
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23 ? 2018年2月到4月是CRISPR-Dx技術(shù)的爆發(fā)期。Doudna實驗室和張鋒實驗室各有一篇論文于2月15日被Science在線發(fā)表。在4月27日的紙版的Science中，這兩篇論文連同張鋒團(tuán)隊的另一篇論文 “back-to-back-to-back”一起發(fā)表。在Doudna的Science論文中，他們找到了Cas13a在DNA分子識別、剪切和降解上的相應(yīng)蛋白——Cas12a。Cas12a不是一個新蛋白，而是張鋒團(tuán)隊于2015年9月發(fā)現(xiàn)并命名的Cpf1（圖8）。
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Cas12a-crRNA識別單鏈或雙鏈DNA。一旦被激活后，Cas12a非特異性地剪切、降解單鏈DNA。他們借鑒了SHERLOCK技術(shù)，也引進(jìn)了RPA步驟。RPA
+
Cas12a成為新的核酸分子檢驗技術(shù)，被命名為DETECTR，與英文的“探測器”諧音。與SHERLOCK相比，DETECTR省掉了從擴增后的DNA產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄到RNA這一步。
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