PCR擴(kuò)增后沒有條帶是怎么回事
PCR的反應(yīng)條件與很多參數(shù)有關(guān)系。如模板濃度，引物長(zhǎng)度及GC含量，引物濃度，dNTPs濃度，選用的taq enzyme,緩沖液的離子含量，產(chǎn)物大小，變性時(shí)間，退火溫度及時(shí)間，延長(zhǎng)的時(shí)間。
物理原因：變性對(duì)PCR擴(kuò)增來說相當(dāng)重要，如變性溫度低，變性時(shí)間短，極有可能出現(xiàn)假陰性;退火溫度過低，可致非特異性擴(kuò)增而降低特異性擴(kuò)增效率退火溫度過高影響引物與模板的結(jié)合而降低PCR擴(kuò)增效率。
有時(shí)還有必要用標(biāo)準(zhǔn)的溫度計(jì)，檢測(cè)一下擴(kuò)增儀或水溶鍋內(nèi)的變性、退火和延伸溫度，這也是PCR失敗的原因之一。
靶序列變異：如靶序列發(fā)生突變或缺失，影響引物與模板特異性結(jié)合，或因靶序列某 段缺失使引物與模板失去互補(bǔ)序列，其PCR擴(kuò)增是不會(huì)成功的。
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