逆轉(zhuǎn)錄酶的活性特點(diǎn)
①DNA聚合酶活性;以RNA為模板,催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物,多為賴氨酸的tRNA,在引物tRNA 3'-末端以5'→3'方向合成DNA。反轉(zhuǎn)錄酶中不具有3'→5'外切酶活性,因此沒有校正功能,所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯(cuò)率比較高。
②RNase H活性;由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子,將由RNase H從RNA 5'端水解掉RNA分子。
③DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性;以反轉(zhuǎn)錄合成的第一條DNA單鏈為模板,以dNTP為底物,再合成第二條DNA分子。除此之外,有些逆轉(zhuǎn)錄酶還有DNA內(nèi)切酶活性,這可能與病毒基因整合到宿主細(xì)胞染色體DNA中有關(guān)。
逆轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)現(xiàn)對于遺傳工程技術(shù)起了很大的推動(dòng)作用,它已成為一種重要的工具酶。用組織細(xì)胞提取mRNA并以它為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下,合成出互補(bǔ)的cDNA,由此可構(gòu)建出cDNA文庫(cDNA library),從中篩選特異的目的基因,這是在基因工程技術(shù)中最常用的獲得目的基因的方法。
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