GFP綠色熒光蛋白的檢測方法有哪些?
檢測方法:
1、實驗準(zhǔn)備
? Modulus單管型多功能檢測儀
? Blue熒光模塊(P/N 9200-040)
? 微量適配器(P/N 9200-928)
? 純化的rAcGFP1蛋白(Clontech,NO.632502)
? 200ul加樣器與20ul加樣器
? TE Buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)
? 1.5ml離心管
2、.儀器準(zhǔn)備
2.1 關(guān)閉Modulus的電源,為Modulus插入BLUE熒光檢測模塊.
2.2 打開Modulus的電源,儀器預(yù)熱1min
2.3 按照說明插入微量適配器
3.、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線
3.1 對rAcGFP1進(jìn)行系列稀釋
3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀釋后溶液。注意:避免在微量比色杯中出現(xiàn)氣泡,負(fù)責(zé)會引起檢測誤差。.
3.3 將微量比色杯插入到微量適配器中,點"Measure Fluorescence Raw."檢測
3.4 記錄檢測結(jié)果,對其他樣品重復(fù)4.2-4.3的步驟
3.5 利用熒光值(FSU)與樣品濃度做出標(biāo)準(zhǔn)曲線
4、 校準(zhǔn)
4.1 使用Modulus檢測未知樣品前,你可以使用rAcGFP1稀釋液來校準(zhǔn)Modulus儀器
4.2 使用表1中的5個稀釋液來校準(zhǔn)Modulus。選擇"ng/μL"作為測量單位,使用0 ng/μL 作為空白標(biāo)準(zhǔn);為了盡可能準(zhǔn)確,使用接近實際樣品的稀釋液做其他幾個點的校準(zhǔn)。
4.3 保存校準(zhǔn),可供以后調(diào)用 (可選).
4.4 使用"Measure Fluorescence."開始檢測未知樣品。注意:在校準(zhǔn)后就無需再做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.5 樣品濃度將直接在屏幕上顯示.