質(zhì)粒dna的轉(zhuǎn)化結(jié)果分析原理介紹
轉(zhuǎn)化活性是檢測質(zhì)粒生物活性的重要指標(biāo)，在基因克隆技術(shù)中，轉(zhuǎn)化（transformation）是特指以質(zhì)粒 DNA 或以它為載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒 DNA（包括人工染色體）導(dǎo)入細(xì)胞的過程， 是一種常用的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 該過程的關(guān)鍵是受體細(xì)胞的遺傳學(xué)特性及其所處的生理狀態(tài)，用于轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，以防止對導(dǎo)入的外源的切割，用 R -M -符號表示。 此外，為了便于檢測，受體菌一般應(yīng)具有可選擇的標(biāo)記（例如抗生素敏感性、顏色變化等）。 但質(zhì)粒 DNA 能否進(jìn)入受體細(xì)胞則取決于該細(xì)胞是否處于感受態(tài)（competence）。所謂感受態(tài)是指受體細(xì)胞處于容易吸收外源 DNA 的一種生理狀態(tài)，可通過物理化學(xué)的方法誘導(dǎo)形成，也可自然形成（自然感受態(tài)）。 在基因工程技術(shù)中，通常是采用誘導(dǎo)的方法。 大腸桿菌是常用的受體菌，其感受態(tài)一般是通過用 CaCl2 在 0℃ 條件下處理細(xì)胞而形成，基本原理是： 細(xì)菌處于 0℃ 的 CaCl2 低滲溶液中，會膨脹成球形，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，轉(zhuǎn)化混合物中的質(zhì)粒 DNA 形成抗 DNase 的羥基一鈣磷酸復(fù)合物粘附于細(xì)胞表面，經(jīng) 42 ℃ 短時(shí)間熱激處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收 DNA 復(fù)合物，在豐富培養(yǎng)基上生長數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增殖，在選擇培養(yǎng)基上便可獲得所需的轉(zhuǎn)化子。
