重疊延伸PCR
實(shí)驗(yàn)方法原理 此技術(shù)利用PCR技術(shù)能夠在體外進(jìn)行有效的基因重組，而且不需要內(nèi)切酶消化和連接酶處理，可利用這一技術(shù)很快獲得其它依靠限制性內(nèi)切酶消化的方法難以得到的產(chǎn)物。重疊延伸PCR技術(shù)成功的關(guān)鍵是重疊互補(bǔ)引物的設(shè)計(jì)。重疊延伸PCR在基因的定點(diǎn)突變、融合基因的構(gòu)建、長(zhǎng)片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的擴(kuò)增等方面有其廣泛而獨(dú)特的應(yīng)用。
實(shí)驗(yàn)材料 基因樣品
儀器、耗材 PCR儀
實(shí)驗(yàn)步驟
1. ?以引物a/b進(jìn)行pcr1。
2. ?以引物c/d進(jìn)行pcr2。
3. ?引物b/c中引入了需要的限制性位點(diǎn)。
4. ?混合二者pcr產(chǎn)物，混合以前最好回收一下。
5. ?進(jìn)行pcr延伸反應(yīng)，只有右面這個(gè)可以延伸。
6. ?以延伸反應(yīng)的產(chǎn)物為模板，以a/d為引物進(jìn)行pcr。
7. ?產(chǎn)物即為所需最終產(chǎn)物。
推薦
熱點(diǎn)排行
一周推薦
